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細胞培養視頻

發布時間: 2022-06-24 04:04:54

『壹』 動物細胞培養的基本過程

一、准備工作

准備工作對開展細胞培養異常重要,工作量也較大,應給予足夠的重視,准備工作中某一環節的疏忽可導致實驗失敗或無法進行。准備工作的內容包括器皿的清洗、乾燥與消毒,培養基與其他試劑的配製、分裝及滅菌,無菌室或超凈台的清潔與消毒,培養箱及其他儀器的檢查與調試。

二、取材

在無菌環境下從機體取出某種組織細胞(視實驗目的而定),經過一定的處理(如消化分散細胞、分離等)後接入培養器皿中,這一過程稱為取材。如是細胞株的擴大培養則無取材這一過程。機體取出的組織細胞的首次培養稱為原代培養。

理論上講各種動物和人體內的所有組織都可以用於培養,實際上幼體組織(尤其是胚胎組織)比成年個體的組織容易培養,分化程度低的組織比分化高的容易培養,腫瘤組織比正常組織容易培養。

取材後應立即處理,盡快培養,因故不能馬上培養時,可將組織塊切成黃豆般大的小塊,置4℃的培養液中保存。取組織時應嚴格保持無菌,同時也要避免接觸其他的有害物質。取病理組織和皮膚及消化道上皮細胞時容易帶菌,為減少污染可用抗菌素處理。

三、培養

將取得的組織細胞接入培養瓶或培養板中的過程稱為培養。如系組織塊培養,則直接將組織塊接入培養器皿底部,幾個小時後組織塊可貼牢在底部,再加入培養基。如系細胞培養,一般應在接入培養器皿之前進行細胞計數,按要求以一定的量(以每毫升細胞數表示)接入培養器皿並直接加入培養基。細胞進入培養器皿後,立即放入培養箱中,使細胞盡早進入生長狀態。

正在培養中的細胞應每隔一定時間觀察一次,觀察的內容包括細胞是否生長良好,形態是否正常,有無污染,培養基的PH是否太酸或太鹼(由酚紅指示劑指示),此外對培養溫度和CO2濃度也要定時檢查。一般原代培養進入培養後有一段潛伏期(數小時到數十天不等),在潛伏期細胞一般不分裂,但可貼壁和遊走。過了潛伏期後細胞進入旺盛的分裂生長期。

細胞長滿瓶底後要進行傳代培養,將一瓶中的細胞消化懸浮後分至兩到三瓶繼續培養。每傳代一次稱為「一代」。二倍體細胞一般只能傳幾十代,而轉化細胞系或細胞株則可無限地傳代下去。轉化細胞可能具有惡性性質,也可能僅有不死性(Immortality)而無惡性。培養正在生長中的細胞是進行各種生物醫學實驗的良好材料。

四、凍存及復甦

為了保存細胞,特別是不易獲得的突變型細胞或細胞株,要將細胞凍存。凍存的溫度一般用液氮的溫度—-196℃,將細胞收集至凍存管中加入含保護劑(一般為二甲亞碸或甘油)的培養基,以一定的冷卻速度凍存,最終保存於液氮中。

在極低的溫度下,細胞保存的時間幾乎是無限的。復甦一般採用快融方法,即從液氮中取出凍存管後,立即放入37℃水中,使之在一分鍾內迅速融解。然後將細胞轉入培養器皿中進行培養。凍存過程中保護劑的選用、細胞密度、降溫速度及復甦時溫度、融化速度等都對細胞活力有影響。

(1)細胞培養視頻擴展閱讀:

進入細胞間開始細胞培養時,注意事項:

①確定所有的細胞操作用的溶液和耗材都已經消毒並檢測沒有問題,不確定的溶液和耗材請勿使用,除非特殊情況,不要借用別人的溶液。

②確定衣服的袖口已經捲起或者白大褂的袖口已經扎緊。

③確定酒精燈內的酒精量,需要的話及時進行補充。

④確定所有需要用到的溶液和耗材都放在伸手可及的位置。為了方便單手開啟瓶蓋,實驗開始前可以把所有瓶蓋旋松。

⑤盡量不要直接傾倒溶液,除非瓶口沒有被燒壞。如果傾倒失敗,溶液粘在瓶口,請用噴過75%酒精的紙巾仔細清潔瓶口周圍(不要接觸到瓶口)後在火焰上簡單燒灼。

⑥操作時如果不能肯定所用的耗材是潔凈的,必須及時更換。

⑦實驗完畢及時收拾,保持工作區域清潔整齊,最後用75%酒精清潔檯面。

『貳』 誰有細胞培養的視頻

你可以直接搜索,細胞培養的視頻,網路裡面有很多。

『叄』 買了個諾基亞C6 放進去的視頻文件 結果"視頻"這個程序里沒有 怎麼回事(請看完詳細內容!!!)

腦其實就是用GHOST軟體將已裝好系統的文件做一個硬碟鏡像,下次裝機時,只要將硬碟鏡像文件恢復即可完成硬碟數據的恢復,它的特點是安裝迅速,比傳統的經硬碟分區-格式化-SETUP安裝系統-安裝軟體要節約很多時間。不足之處是,因每台機器的配置不可能完全相同,故除非是配置完全相同的機器一般首次裝系統時不建議全用GHOST來安裝。但首次系統和軟體安裝完畢後可用GHOST製作硬碟或分區鏡像,這樣當系統崩潰需要重裝時可用GHOST快速恢復。 克隆,就是利用SHOST這個軟體把一個電腦上安裝好的系統「復制」到別一個電腦上(電腦配置要完全一致)。你說的恢復:首先要用GHOST這個軟體做個備份,才能在系統出現問題時恢復。 克隆是一個形象的比喻 他是使用一張GHO的系統盤 不用進行安裝把盤以同樣分區的形式COPY到你的硬碟上 這樣能大大減少安裝時間 一班是2分鍾安裝完系統 恢復使用GHOST就可以了 克隆操作是星際中的操作,魔獸中不怎麼用克隆操作的。舉個簡單的例子吧,星際中的克隆操作,例如你要用一隊蟲族的自殺機去撞神族的三個航母,那麼需要4個去撞一個(我不知道4個能否撞掉一個航母,不太懂,只是例子),你先選那一隊自殺機去撞一個航母,然後按住SHIFT鍵從編隊中迅速的踢出4個自殺機,剩下的8個去撞另一個航母,然後接著踢出4個,剩下的4個去撞第三個航母,這就是一個克隆操作。魔獸中沒有必要,如果你想用獸族的自爆蝙蝠去撞對手的空軍,只要選中蝙蝠的編隊不停的點C鍵然後點在對手的空軍上就行了。操作比較方便。 1.1 克隆概念克隆是英文clone的音譯,簡單講就是一種人工誘導的無性繁殖方式。克隆並不是一個新的概念,克隆(cloning)這個詞源於希臘語中clonos,意為&quot;twig&quot;,即嫩枝。在生物的分子、細胞、個體三個不同層次上,&quot;克隆&quot;有不同的含義。在分子水平上,用分子生物學技術利用細菌或病毒使原來某一片段DNA形成一群DNA分子的過程,叫做分子克隆或DNA克隆,而且相同的分子叫一個克隆。在生物學中,細胞克隆技術的正規名詞為細胞培養技術,通過細胞培養得到大量的細胞或其代謝產物。在自然界指人工培育克隆體(DNA分子、微生物、植物、動物)這一操作過程。核移植是指利用顯微外科手術的方法將胚胎細胞或成體細胞的細胞核移人去核的卵母細胞中,構建成重組胚,通過體內或體外培養、胚胎移植,產生與供體細胞基因型相同的後代的技術過程,又稱為動物克隆技術。根據核供體的來源不同,可將其分為胚胎細胞克隆動物和體細胞克隆動物技術。1.2 克隆研究的主要內容克隆技術是一個復雜的技術體系,是多種技術的綜合,涵蓋了生命復制的全過程。它既包括某些基礎研究又包括了許多技術操作細節。動物克隆的過程,實際上是把一個供體核和去核的卵細胞融合成一個新的胚胎,在人工條件下使它發育,再移植到母體動物,進而得到一個完全和核供體相同的動物個體的過程。主要內容包括:1.2.1 供核細胞的來源和特性1.2.2 細胞質受體的來源和特性1.2.3 重構胚核質適應機理1.2.4 克隆技術支持體系研究1.2.5 重構胚胎體內和體外培養技術1.2.6 克隆技術實用化研究1.3 轉基因克隆動物技術動物克隆技術屬於無性繁殖范疇,能實現基因型復制,使少數優秀個體迅速擴大成群。轉基因克隆技術是轉基因技術和動物克隆技術的有機結合,其研究意義和實用價值又超過了兩種技術。它以轉基因細胞為核供體,採用體細胞核移植技術產生轉基因克隆動物,實現種質創新。轉基因克隆動物技術顯示出現的優勢主要表現在:一是生產效率高;二是周期短,成本低;三是可以決定後代性別。但克隆與無性繁殖是不同的。無性繁殖是指不經過雌雄兩性生殖細胞的結合、只由一個生物體產生後代的生殖方式,常見的有孢子生殖、出芽生殖和分裂生殖。由植物的根、莖、葉等經過壓條或嫁接等方式產生新個體也叫無性繁殖。綿羊、猴子和牛等動物沒有人工操作是不能進行無性繁殖的。科學家把人工遺傳操作動物繁殖的過程叫克隆,這門生物技術叫克隆技術。克隆的基本過程是先將含有遺傳物質的供體細胞的核移植到去除了細胞核的卵細胞中,利用微電流刺激等使兩者融合為一體,然後促使這一新細胞分裂繁殖發育成胚胎,當胚胎發育到一定程度後,再被植入動物<br>網上也有解決這個問題的視頻操作演示<br>你網路搜索「龍雲手機網」就可以了<br>按照網上的視頻教你來操作,就可以順利解決,因為<br>視頻里有很詳細的介紹。關於「手機手機諾基亞N97老是死機」的

『肆』 細胞培養的具體步驟和要求以及注意事項

一、細胞復甦

將凍存細胞從液氮中取出後,在37℃水浴鍋內不斷搖動促進其融化。移人15ml離心管中,加入10ml預熱的DMEM完全培養基,輕輕吹勻,離心,2000rpmX2min,棄上清液。

加入10ml DMEM培養基清洗,棄上清液。加入10ml DMEM完全培養基,輕輕吹打,接種於10cm盤中,在含5%CO2的細胞培養箱中培養。

二、細胞傳代

細胞密度達到80%~90%時.去培養基,10ml PBS清洗2次。加入3ml含0.25%EDTA的胰蛋白酶,放人細胞培養箱3min。加人1ml DMEM完全培養基終止胰酶消化,轉移至15ml離心管。

加入10ml PBS清洗細胞培養盤,轉移至15ml離心管,2000rpmX2min,棄上清液。再加入10ml PBS(經高壓滅菌,保存於40C),吹勻,吸取10微升進行計數,按照1×106/盤接種,在含5%CO2的細胞培養箱繼續培養。

三、細胞凍存

細胞密度達到80%~90%時,去培養基,10ml PBS清洗2次。加入3ml含0.25%EDTA的胰蛋白酶,放人細胞培養箱3min。加入lmlDMEM完全培養基終止胰酶消化,轉移至15ml離心管。加入10ml PBS清洗細胞培養盤,轉移至15ml離心管,2000rpmX2min,棄上清液。

加入lml凍存液(90%血清,10%DMSO),放入凍存盒內(盒內有異丙醇,以保證溫度降低的速度),立即放入一80℃冰箱內,過夜,第二天放入液氮中,可以保存至少兩年,如不放人液氮,可以保存三個月。

凍存液的配製:70%的完全培養基+20%FBS+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加,邊滴邊搖。

注意事項

(1)進入細胞間開始細胞培養時,必須嚴格按照下列步驟操作:

①確定所有的細胞操作用的溶液和耗材都已經消毒並檢測沒有問題,不確定的溶液和耗材請勿使用,除非特殊情況,不要借用別人的溶液。

②確定衣服的袖口已經捲起或者白大褂的袖口已經扎緊。

③確定酒精燈內的酒精量,需要的話及時進行補充。

④確定所有需要用到的溶液和耗材都放在伸手可及的位置。為了方便單手開啟瓶蓋,實驗開始前可以把所有瓶蓋旋松。

⑤盡量不要直接傾倒溶液,除非瓶口沒有被燒壞。如果傾倒失敗,溶液粘在瓶口,請用噴過75%酒精的紙巾仔細清潔瓶口周圍(不要接觸到瓶口)後在火焰上簡單燒灼。

⑥操作時如果不能肯定所用的耗材是潔凈的,必須及時更換。

⑦實驗完畢及時收拾,保持工作區域清潔整齊,最後用75%酒精清潔檯面。

(2)細胞污染的預防

①實驗用品防止污染。細胞培養所用試劑、耗材、器材的清洗、消毒要徹底,各種溶液滅菌要仔細,並在無菌實驗檢測陰性後才能使用。操作室及剩餘的無菌器材要定期清潔、消毒、滅菌。

②操作過程防止污染。

③穿著容易起靜電或吸附灰塵的衣物必須更換為白大褂後才能進入細胞間。

④實驗開始前需要確定戴的手套沒有問題,只要接觸過生物安全櫃之外的物品,必須及時對手套進行消毒。

⑤進入細胞培養間後關好門,坐下來盡量少走動以免影響生物安全櫃的風簾。工作開始前要先用75%酒精棉球擦手和瓶蓋。事先要嚴格檢查所用的器材、溶液和細胞,不要把污染品或未經消毒的物品帶入無菌室內,更不能隨便使用,以免造成大規模污染。

⑥細胞操作時動作要輕,必須在火焰周圍無菌區內打開瓶口,並將瓶口放在火焰周圍簡單轉動燒灼,注意不要讓火焰把塑料瓶口燒化。

⑦實驗操作時生物安全櫃的隔板要盡可能放低,盡量減少談話,打噴嚏或咳嗽時絕對不能對著工作區,以免造成不必要的污染。

⑧瓶蓋應當倒放在遠離自己的地方,以避免瓶蓋被誤操作所污染。

⑨不要從敞開的容器口上方經過,以避免衣服上掉落不明物體對細胞的污染。

⑩實驗操作時要注意及時更換巴斯德吸管、移液槍槍頭和移液管,切勿一根管子做到底。一旦發現接觸了非潔凈或者無法確定潔凈的物品必須直接丟棄。實驗完畢應及時收拾,保持實驗室清潔整齊,最後用75%酒精清潔檯面。

(3)防止細胞交叉污染

①在進行多種細胞培養操作時,所用器具要嚴格區分,最好作上標記便於辨別。按順序進行操作,一次只處理一種細胞,多種細胞多種操作一起進行時易發生t昆亂。

②在進行換液或傳代操作時,粘有細胞的移液槍頭和移液管不要觸及試劑瓶瓶口,以免把細胞帶到培養基中污染其他細胞。

③所有細胞一旦購置,或從別處引入,或自己建立,必須及時保種凍存,一旦發生污染可重新復甦細胞,繼續培養。

(4)細胞培養視頻擴展閱讀:

細胞培養(cell culture)是指在體外模擬體內環境(無菌、適宜溫度、酸鹼度和一定營養條件等),使之生存、生長、繁殖並維持主要結構和功能的一種方法。細胞培養也叫細胞克隆技術,在生物學中的正規名詞為細胞培養技術。

不論對於整個生物工程技術,還是其中之一的生物克隆技術來說,細胞培養都是一個必不可少的過程,細胞培養本身就是細胞的大規模克隆。細胞培養技術可以由一個細胞經過大量培養成為簡單的單細胞或極少分化的多細胞,這是克隆技術必不可少的環節,而且細胞培養本身就是細胞的克隆。

細胞培養技術是細胞生物學研究方法中重要和常用技術,通過細胞培養既可以獲得大量細胞,又可以藉此研究細胞的信號轉導、細胞的合成代謝、細胞的生長增殖等。

『伍』 傳代細胞的培養步驟

1、附著型胞(adherentcell)

(1)吸掉舊培養液。

(2)用D-PBS洗滌細胞一至二次。

(3)加入trypsin-EDTA溶液(1ml/25cm2,2ml/75cm2),37℃作用數分鍾,於倒立顯微鏡下觀察,當細胞將要分離而呈現圓粒狀時,吸掉trypsin-EDTA溶液。(若不移去trypsin-EDTA,則在trypsin-EDTA作用後,加入適量含血清之新鮮培養基終止trypsin作用,離心後再吸掉上清液。

(4)輕拍培養瓶使細胞自瓶壁脫落,加入適量之新鮮培養基,以吸管上下吸放數次以打散細胞團塊,混和均勻後,依稀釋比例轉移至新的培養瓶中,以正常培養條件培養。

2、懸浮型細胞(suspensioncell)

(1)吸出細胞培養液,放入離心管中,離心1000rpm5分鍾。

(2)吸掉上清液,加入適量之新鮮培養基,混和均勻後,依稀釋比例轉移至新的培養瓶中,以正常培養條件培養。

3、融合瘤(hybridoma)

有些hybridomacell需培養三天以上才會產生抗體,若是更換培養基,則可能會失去抗體。因此繼代培養不需離心後更換培養基,直接添加新鮮培養基稀釋細胞濃度即可。若體積太大,可傾斜放置,或分殖至新培養瓶中。

(5)細胞培養視頻擴展閱讀:

傳代方法:

1、懸浮生長細胞傳代

多採用離心法傳代。1000轉/分,20-30秒後去上清。沉澱細胞加新培養液後再混勻傳代。亦有直接傳代 法,即懸浮細胞沉澱在瓶壁時,將上清培養液去除1/2-1/3,然後用吸管直接吹打形成細胞懸液再傳代.

2、半懸浮生長細胞傳代(Hela細胞)

此類細胞部分呈現貼壁生長現象,但貼壁不牢,可用直接吹打法使細胞從瓶壁脫落下來,進行傳代。

3、貼壁生長細胞傳代

採用酶消化法傳代。常用的消化液有0.25%的胰蛋白酶液。

『陸』 高中生物細胞工程技術

細胞工程又分為植物細胞工程和動物細胞工程。高中課本上對細胞工程的解釋:指應用細胞生物學和分子生物學的原理和方法,通過細胞水平或細胞器水平上的操作,按照人的意願來改變細胞內的遺傳物質或獲得細胞產品的一門綜合科學技術。
1。植物細胞工程的基本技術有植物組織培養技術,植物體細胞雜交技術(這中間還有很多學問,我就先粗略回答一下)
植物組織培養技術就是用植物身上任何一部分(其實也並不是任何一部分,一般為了提高成功率,都會選擇分化程度較低的植物細胞,如胚胎幹細胞,卵子精子的分化程度就較低,植物的體細胞如葉肉細胞,保衛細胞等這種分化程度較高,一般不易培養。)經過認為培養使其生長成為完整的植株。
植物體細胞雜交技術就是將兩種植物細胞通過一定的物理或化學方法融合(需要先去掉植物細胞的細胞壁,利用生物膜的流動性即可融合),使雜交細胞同時具有融合前兩種細胞的共同有點,比如人們就將番茄細胞和馬鈴薯細胞融合,希望通過雜交細胞培養出來的新植株上部結番茄,地下長馬鈴薯(但好像因為基因的選擇性表達,目前雖然有這種植株,但它並沒有又結馬鈴薯又結番)。
2。動物細胞工程常用的技術手段有動物細胞培養,動物細胞核移植,動物細胞融合,生產單克隆抗體,其中動物細胞培養技術是其他動物細胞工程技術的基礎。
動物細胞培養就如其名,人工將動物細胞分散並培養。應用有研製病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體等,基因工程中將目的基因載入受體細胞後也許細胞培養,培養動物細胞還可以用來監測有毒物質,或研究病變細胞,為疾病提供理論依據。
動物細胞核移植內容也如其名,就是將動物的一個細胞的細胞核移入一個已經去掉細胞核的卵母細胞中,使其重組並發育成一個新的胚胎,這個新的胚胎將發育為新的個體。用核移植方法得到的動物稱為克隆動物。哺乳動物核移植可分為胚胎細胞核移植,體細胞核移植(具體過程不做詳解了,有興趣可以再問)。
動物細胞融合也是用一定的物理或化學方法將兩個或多個動物細胞結合形成一個細胞。
生產單克隆抗體需要用到動物細胞培養和動物細胞融合著兩個技術,要想詳細了解的話網路知道上有,還是我答的哦。

『柒』 求視頻:RAW264.7細胞的培養 視頻

不一定非要看RAW264.7細胞的培養,可以看看其他動物細胞培養作為參照。在網路視頻直接搜動物細胞培養就行。主要還是自己養的時候自己摸索,看你的細胞到底怎樣生長狀態好。祝你好運!

『捌』 動物細胞培養過程要注意什麼

自己看吧。
一、復甦
1.把凍存管從液氮中取出來,立即投入37℃水浴鍋中,輕微搖動。液體都融化後(大概1-1.5分鍾),拿出來噴點酒精放到超凈工作台里。
2.把上述細胞懸液吸到裝10ml培養基的15ml的離心管中(用培養基把凍存管洗一遍,把粘在壁上的細胞都洗下來),1000轉離心5分鍾。
3.把上清液倒掉,加1ml培養基把細胞懸浮起來。吸到裝有10ml培養基的10cm培養皿中前後左右輕輕搖動,使培養皿中的細胞均勻分布。
4.標好細胞種類和日期、培養人名字等,放到CO2培養箱中培養,細胞貼壁後換培養基。
5.3天換一次培養基。
二、傳代
1.培養皿中的細胞覆蓋率達到80%-90%時要傳代。
2.把原有培養基吸掉。
3.加適當的胰蛋白酶(能覆蓋細胞就行),消化1-2分鍾。
4.細胞都變圓後加如入等體積的含血清的培養基終止消化。
5.用移液槍吹打細胞,把細胞都懸浮起來。
6.把細胞吸到15ml的離心管中,1000轉離心5分鍾。
7.倒掉上清液,加1-2ml培養基,把細胞都吹起來。
8.根據細胞種類把細胞傳到幾個培養皿中。一般,癌細胞分5個,正常細胞傳3個。繼續培養。
三、 凍存
把細胞消化下來並離心(同上)。用配好的凍存液把細胞懸浮起來,分裝到滅菌的凍存管中,靜止幾分鍾,寫明細胞種類,凍存日期。4℃ 30min,-20℃ 30min,-80℃過夜,然後放到液氮灌中保存。
凍存液的配製: 70%的完全培養基 20񳀐%DMSO. DMSO要慢慢滴加,邊滴邊搖。
要注意的就是無菌操作!

『玖』 動物細胞培養的注意事項

原代動物細胞培養:
1、實驗材料要新鮮,從活體分離材料後要低溫保存,並盡快進行細胞分離實驗。
2、無菌操作。操作時用的培養液,可加平時細胞培養液5倍含量的青鏈黴素。
3、用酶法分離細胞時,注意酶液的濃度和控制消化時間。
貼塊法分離細胞時,注意動作要輕柔,不要傷到細胞組織,組織塊邊緣盡量平整有利於細胞游離。
4、培養液的選擇。不同的細胞有對培養液中營養的要求不同,根據所分離細胞的特性選擇。

傳代細胞培養:
1、無菌操作
2、控制消化時間
3、及時關注細胞生長狀態

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