『壹』 請問成都有哪些生物公司或院校可以代做實驗的
威斯騰生物提供課題設計，標書撰寫，整體實驗服務，SCI協同發表的一站式服務，公司發展不錯，你可以聯系試試。
『貳』 如何做RT-PCR實驗
實驗原理及過程
實驗步驟
實驗原理
1 所有容器高溫滅菌兩次，DEPC高溫滅菌，所有的試劑用DEPC配製，高溫滅菌。 去除RNA酶（外源）的影響。 高溫滅菌兩次可以破壞RNA酶的復性過程.雖然RNA酶極易復性，但兩次連續的高溫會打亂它的復性歷程，從而使RNA酶失活。 DEPC是RNA酶的非競爭性抑制劑。DEPC可以與RNA酶的活性中心的組氨酸咪脞環上的N結合，從而使RNA酶失活。 因為DEPC能與RNA的N結合，從而修飾RNA，所以，必須將DEPC最終除去。在高溫滅菌時，DEPC因高溫分解而揮發。（UV也能修飾RNA，實驗時應避免。） DEPC滅菌後稱為DEPC水，它是不含DEPC的。 實驗過程中要勤換手套，必要時要在超凈工作台中進行。
2 在一滅菌2mL管中加入: 5mol/L異硫氰酸胍 0.7mL 苯酚 0.4mL 2mol/L NaAc(pH4.0) 0.1mL 必須提前准備好變性劑。 異硫氰酸胍可以變性RNA酶，也可以破細胞。本試驗不可以用酶法破細胞。因為蛋白酶K的適合的條件也可以是RNA酶有活性。 NaAc酸性可以使DNA在有機相（酚相）中，而在鹼性條件下，DNA和RNA都在水相中，無法分離，所以，Ph在本是嚴重很關鍵。 苯酚用於抽提DNA和蛋白質。
3 稱取0.2g小麥黃化苗的葉片，迅速在液氮中研磨成粉末,轉入已准備好的離心管中。 劇烈震盪。 低溫防止內源性RNA酶降解RNA。 劇烈震盪是使所有的細胞散開，浸在變性劑中。低溫的細胞在相對來說高溫的液體中是會形成一團，這樣就會使內部的RNA沒有水解RNA的機會。 小麥的黃化苗因為沒有光合作用，所以含糖少，易於抽提。
4 混勻,冰浴30min。
5 4℃,12000rpm,10min。
6 上清至另一離心管中 加0.4Ml氯仿，劇烈震盪。冰浴放置5min。 去脂類。
7 40C,12000rpm,10min。
8 棄有機相（下層） 加入0.4Ml氯仿和0.4Ml酚。室溫放置5min。 去脂類和蛋白質。
9 40C,12000rpm,10min 棄有機相，加入等體積異丙醇。-200C放置1h。 去糖，脫水。因為體系高鹽（2mol/L NaAc），所以可以使RNA沉澱。
10 40C,12000rpm,10min 沉澱用70%乙醇洗兩次。 因為提出的量很少，可能不可見，所以離心是要有方向標記。
11 室溫稍乾燥。 RNA是非常不好溶解的，所以只能稍乾燥。若不溶解是因為有太多的糖的殘余。
12 沉澱加20uLDEPC水溶解(-200C保存) DEPC水中不含RNA酶。
13 RNA電泳： 1％瓊脂糖膠20 mL 8μL樣品 1μL樣品緩沖液 1μLSYBR 100V恆壓電泳 測OD260和OD260／OD280
『叄』 開始做RT-PCR中遇到的問題
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『肆』 在做pcr的操作過程中需注意哪些問題
首先，在設計PCR引物時，結構要好，長度應在20bp左右，避免引物間形成引物二聚體。兩條引物的退火溫度盡量保持一致，最好是在55度左右。
其次，使用的DNA模板量是比較關鍵的，應使用純度較高，基因組較完全，沒有產生斷鏈的基因組DNA。
然後是PCR體系中各個試劑的使用，比如說酶的純度，活性，並且要注意酶量一定要適中，過尤不及。各DNTP的量要保持一致。PCRbuffer中要注意有無添加鎂離子等幫助反應進行的東西。等等。
最後是PCR程序的設置。如果怕一開始就使用一個固定的退火溫度擴增不出來，可以先小批量得試驗溫度梯度，或者用touchdown程序，即先設置一個較高的退火溫度，這樣引物的特異性結合會比較好，然後每個循環的退火溫度都比上個循環低0.5度或1度，最終停留在某一個較合適的溫度完成整個程序。
PCR反應中有太多細節要注意了。只能在試驗中摸索，進步。
現在也有公司可以代做PCR，省時省力，大大縮短研究周期。
可以來杭州百替生物看看哦！
『伍』 用RT-PCR檢測5個基因的表達水平要花多少錢從開始設計引物到出來結果，全套的，謝謝
泛泛的說沒有意義，因為基因不同引物設計難度和引物大小不同，以及之後的PCR難度都不相同，所以費用差別很大。建議直接詢問可以代做試驗的生物技術公司。
『陸』 熒光定量PCR能不能代替普通PCR 做普通PCR實驗
熒光實時定量PCR的方法更精確代替一般的pcr實驗還是沒問題的
『柒』 簡述PCR技術操作步驟
PCR即聚合酶鏈式反應（Polymerase chain reaction）的縮寫，它是體外酶促合成特異DNA片段的方法。這一方法的要點是合成兩個分別互補於待擴增DNA片段兩端的小片段引物，在含有引物、待擴增DNA模板核苷酸底物和DNA多聚酶的反應體系中DNA復制反復進行，在短時間內可以取得大量擴增產物。其原理是寡聚核苷酸鏈引物在DNA聚合酶的作用下沿模板延伸，合成兩個與靶DNA兩側序列互補的引物，在體外進行靶DNA的重復合成。
主要的技術步驟是：
（1）DNA變性 加熱使靶DNA序列雙鏈解離成單鏈DNA。
（2）引物與靶DNA退火 適當降低溫度，使兩個引物分別結合成靶DNA兩條的3′末端向5′末端延伸。
（3）引物延伸 在DNA聚合酶的催化下，引物沿著靶DNA3′末端向5′末端延伸。新合成的DNA鏈在變性解離後，又可作為模板與引物雜交，並且在DNA聚合酶的催化下，引導合成新的靶DNA鏈。如此反復進行以上3個步驟，即可使靶DNA片段指數性擴增。