『壹』 请问成都有哪些生物公司或院校可以代做实验的
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『贰』 如何做RT-PCR实验
实验原理及过程
实验步骤
实验原理
1 所有容器高温灭菌两次，DEPC高温灭菌，所有的试剂用DEPC配制，高温灭菌。 去除RNA酶（外源）的影响。 高温灭菌两次可以破坏RNA酶的复性过程.虽然RNA酶极易复性，但两次连续的高温会打乱它的复性历程，从而使RNA酶失活。 DEPC是RNA酶的非竞争性抑制剂。DEPC可以与RNA酶的活性中心的组氨酸咪脞环上的N结合，从而使RNA酶失活。 因为DEPC能与RNA的N结合，从而修饰RNA，所以，必须将DEPC最终除去。在高温灭菌时，DEPC因高温分解而挥发。（UV也能修饰RNA，实验时应避免。） DEPC灭菌后称为DEPC水，它是不含DEPC的。 实验过程中要勤换手套，必要时要在超净工作台中进行。
2 在一灭菌2mL管中加入: 5mol/L异硫氰酸胍 0.7mL 苯酚 0.4mL 2mol/L NaAc(pH4.0) 0.1mL 必须提前准备好变性剂。 异硫氰酸胍可以变性RNA酶，也可以破细胞。本试验不可以用酶法破细胞。因为蛋白酶K的适合的条件也可以是RNA酶有活性。 NaAc酸性可以使DNA在有机相（酚相）中，而在碱性条件下，DNA和RNA都在水相中，无法分离，所以，Ph在本是严重很关键。 苯酚用于抽提DNA和蛋白质。
3 称取0.2g小麦黄化苗的叶片，迅速在液氮中研磨成粉末,转入已准备好的离心管中。 剧烈震荡。 低温防止内源性RNA酶降解RNA。 剧烈震荡是使所有的细胞散开，浸在变性剂中。低温的细胞在相对来说高温的液体中是会形成一团，这样就会使内部的RNA没有水解RNA的机会。 小麦的黄化苗因为没有光合作用，所以含糖少，易于抽提。
4 混匀,冰浴30min。
5 4℃,12000rpm,10min。
6 上清至另一离心管中 加0.4Ml氯仿，剧烈震荡。冰浴放置5min。 去脂类。
7 40C,12000rpm,10min。
8 弃有机相（下层） 加入0.4Ml氯仿和0.4Ml酚。室温放置5min。 去脂类和蛋白质。
9 40C,12000rpm,10min 弃有机相，加入等体积异丙醇。-200C放置1h。 去糖，脱水。因为体系高盐（2mol/L NaAc），所以可以使RNA沉淀。
10 40C,12000rpm,10min 沉淀用70%乙醇洗两次。 因为提出的量很少，可能不可见，所以离心是要有方向标记。
11 室温稍干燥。 RNA是非常不好溶解的，所以只能稍干燥。若不溶解是因为有太多的糖的残余。
12 沉淀加20uLDEPC水溶解(-200C保存) DEPC水中不含RNA酶。
13 RNA电泳： 1％琼脂糖胶20 mL 8μL样品 1μL样品缓冲液 1μLSYBR 100V恒压电泳 测OD260和OD260／OD280
『叁』 开始做RT-PCR中遇到的问题
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『肆』 在做pcr的操作过程中需注意哪些问题
首先，在设计PCR引物时，结构要好，长度应在20bp左右，避免引物间形成引物二聚体。两条引物的退火温度尽量保持一致，最好是在55度左右。
其次，使用的DNA模板量是比较关键的，应使用纯度较高，基因组较完全，没有产生断链的基因组DNA。
然后是PCR体系中各个试剂的使用，比如说酶的纯度，活性，并且要注意酶量一定要适中，过尤不及。各DNTP的量要保持一致。PCRbuffer中要注意有无添加镁离子等帮助反应进行的东西。等等。
最后是PCR程序的设置。如果怕一开始就使用一个固定的退火温度扩增不出来，可以先小批量得试验温度梯度，或者用touchdown程序，即先设置一个较高的退火温度，这样引物的特异性结合会比较好，然后每个循环的退火温度都比上个循环低0.5度或1度，最终停留在某一个较合适的温度完成整个程序。
PCR反应中有太多细节要注意了。只能在试验中摸索，进步。
现在也有公司可以代做PCR，省时省力，大大缩短研究周期。
可以来杭州百替生物看看哦！
『伍』 用RT-PCR检测5个基因的表达水平要花多少钱从开始设计引物到出来结果，全套的，谢谢
泛泛的说没有意义，因为基因不同引物设计难度和引物大小不同，以及之后的PCR难度都不相同，所以费用差别很大。建议直接询问可以代做试验的生物技术公司。
『陆』 荧光定量PCR能不能代替普通PCR 做普通PCR实验
荧光实时定量PCR的方法更精确代替一般的pcr实验还是没问题的
『柒』 简述PCR技术操作步骤
PCR即聚合酶链式反应（Polymerase chain reaction）的缩写，它是体外酶促合成特异DNA片段的方法。这一方法的要点是合成两个分别互补于待扩增DNA片段两端的小片段引物，在含有引物、待扩增DNA模板核苷酸底物和DNA多聚酶的反应体系中DNA复制反复进行，在短时间内可以取得大量扩增产物。其原理是寡聚核苷酸链引物在DNA聚合酶的作用下沿模板延伸，合成两个与靶DNA两侧序列互补的引物，在体外进行靶DNA的重复合成。
主要的技术步骤是：
（1）DNA变性 加热使靶DNA序列双链解离成单链DNA。
（2）引物与靶DNA退火 适当降低温度，使两个引物分别结合成靶DNA两条的3′末端向5′末端延伸。
（3）引物延伸 在DNA聚合酶的催化下，引物沿着靶DNA3′末端向5′末端延伸。新合成的DNA链在变性解离后，又可作为模板与引物杂交，并且在DNA聚合酶的催化下，引导合成新的靶DNA链。如此反复进行以上3个步骤，即可使靶DNA片段指数性扩增。